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動(dòng)物組織勻漿制備

簡(jiǎn)要描述:動(dòng)物組織勻漿制備由經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成,勻漿的方式有多種:手工勻漿、機(jī)器勻漿、超聲勻漿、反復(fù)凍融。

  • 更新時(shí)間:2024-06-17
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1、取組織塊(0.2g-1g),少可到2~5mg,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,放入510m1的小燒杯內(nèi)。

2、用移液管量取預(yù)冷的勻漿介質(zhì)或者用0. 86%冷生理鹽水,勻漿1 )質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿質(zhì)或生理鹽水于燒杯中,用ykxj盡快剪碎組織塊(天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。

3、勻漿的方式有多種:手工勻漿、機(jī)器勻漿、超聲勻漿、反復(fù)凍融。

手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘) ,充分研碎,使組織勻漿化。

機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~ 15000r /min上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿

機(jī)制備(勻漿時(shí)間10/次,間隙30秒,連續(xù)3~5,在冰水中進(jìn)行) ,皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。

超聲粉碎:用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲 波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30

使細(xì)胞破碎,也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用40安培,5/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。反復(fù)凍融:培養(yǎng)或者分離的細(xì)胞可以用以上的方法勻漿,也可以反復(fù)凍溶3次左右(即讓細(xì)胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結(jié)冰,溶解,再結(jié)冰,再溶解,反復(fù)3次左右) ,但有部分酶活力會(huì)受影響。取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可),顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破,若沒有破則可以延長(zhǎng)勻漿時(shí)間或增加凍融次數(shù)。

4、將制備好的10%勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000r /min左右離心10~15分鐘,若檢測(cè)

ATP酶,則只需要1000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,將離心好的勻漿留下,上清棄下面沉淀。



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