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流式JC-1檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述:線(xiàn)粒體膜電位是指線(xiàn)粒體內(nèi)膜兩側(cè)的電位差,它是細(xì)胞能量代謝的關(guān)鍵指標(biāo)之一。JC1是一種常用的線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)染料,其原理是基于JC1 在不同濃度下呈現(xiàn)出不同的熒光顏色。
JC1 有單體和多聚體兩種存在狀態(tài)。在低濃度時(shí),JC1 以單體存在,此時(shí)可以檢測(cè)到綠色熒光。在流式檢測(cè)中,通常使用 FL-1通道(與 FITC通道)進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng) JC1 濃度較高時(shí),它會(huì)以多聚體形式存在,此時(shí)可以檢測(cè)到紅色熒光。在流

  • 更新時(shí)間:2024-06-17
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JC-1線(xiàn)粒體膜電位熒光探針染色步驟(流式細(xì)胞儀法):

1. 于6-,12或24-孔板上進(jìn)行細(xì)胞鋪板,密度為5×105 cells/mL。37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。 注:進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)時(shí)的細(xì)胞密度建議不超過(guò)1×106 cells/mL,也可根據(jù)自己的細(xì)胞類(lèi)型培養(yǎng)至合適的密度。

2. 取0.5 mL細(xì)胞懸液至無(wú)菌的離心管內(nèi);

3. 室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清。

4. 用0.5 mL JC-1工作液重懸細(xì)胞,于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min;注意:一般情況,15 min足以進(jìn)行充分的染色。

5. 室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;

6. 用2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞,之后室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;

7. 重復(fù)步驟6);

8. 用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞,即可進(jìn)行后續(xù)的流式分析。注意:請(qǐng)馬上進(jìn)行流式定量分析,此細(xì)節(jié)很重要。

數(shù)據(jù)分析:含有紅色JC-1聚集物的健康細(xì)胞線(xiàn)粒體用FL2通道檢測(cè);含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細(xì)胞用FL1(FITC)通道檢測(cè)。



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